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生物切片制作廠家與您分享切片制作方法

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  一、制備顯微標(biāo)本的切片法

  這是*常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質(zhì),將整塊組織加以包埋,*后凝固成均勻一致的固態(tài)結(jié)構(gòu)。用切片機(jī)制取*薄的切片。為了讓石蠟?zāi)芙虢M織內(nèi)部,需將組織經(jīng)過脫水等處理。過程大致如下:

  ⑴固定:生物標(biāo)本脫離機(jī)體或培養(yǎng)環(huán)境,細(xì)胞會發(fā)生自溶,腐敗分解。因此,需用固定劑處理,使蛋白質(zhì)凝固停止瀕死或死后變化。凡供******保存的標(biāo)本都需經(jīng)固定處理。

  常用的固定劑是甲醛、乙醇等,能使蛋白質(zhì)凝固。還有由幾種試劑配成的固定液,例如Carnoy固定液,由無水酒精、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更強(qiáng),不含水分,可避免水溶性物質(zhì)如糖原等在固定過程中損失。

  ⑵脫水:是將組織細(xì)胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),濃度遞升到100%。此過程還使組織塊進(jìn)一步硬化。

  ⑶透明:是用既能溶于純酒精又能融解石蠟的有機(jī)溶劑,將組織中的酒精取代,以便石蠟浸入。通常用二甲苯(xylene)為透明劑。

  ⑷浸蠟:在溫箱內(nèi)進(jìn)行。已透明的組織塊放入加熱融解的石蠟中,讓石蠟浸透組織,作為支持介質(zhì)。

  ⑸包埋:將已浸蠟的組織塊放入熱融的包埋石蠟中,迅速冷凝,組織決便被蠟包埋。

  ⑹切片:用切片機(jī)。常用的切片機(jī)有輪轉(zhuǎn)式、平推式的。用輪轉(zhuǎn)式的易于切出連續(xù)切片。切片厚度隨制片目的而調(diào)整。教學(xué)標(biāo)本厚度多是5~6μm。

  ⑺貼片烤干:石蠟切片在溫水上展平后,移在玻片上,烤干,即可供染色處理。染色后用樹膠、蓋坡片封固,可******保存。

  二冷凍切片法

  冷凍切片法是借組織在低溫下,凍結(jié)變硬而達(dá)到符合切片要求。冷凍切片法需有冷凍切片機(jī),或在普通切片上配制冷設(shè)施。恒冷切片機(jī)是高級冷凍切片設(shè)備。它有一個(gè)恒冷箱,標(biāo)本致冷臺和切片機(jī)都裝在箱內(nèi)。恒冷箱的作用類似冰箱,可在一定范圍內(nèi)調(diào)整溫度,其結(jié)構(gòu)有利于保持箱內(nèi)恒定低溫,減少箱門打開時(shí)環(huán)境溫度的干擾。切片機(jī)的輪轉(zhuǎn)把手裝在箱外,便于操縱切片。

  冷凍切片法的優(yōu)點(diǎn)是:在處理得當(dāng)時(shí),它可以******限度地保持組織的新鮮狀態(tài)。并且,由于不需經(jīng)脫水、透明、浸蠟等過程中有機(jī)溶劑的處理,及濕箱浸蠟熱的影響,甚至可不經(jīng)固定。所以能很好地保存組織細(xì)胞的各種成分和酶的活性,因此在酶的組織化學(xué)研究中常用此切片法。

  二、顯示標(biāo)本結(jié)構(gòu)成分的染色法

  一蘇木素伊紅染色法(HE染色法)

  為*常用的染色法。該法應(yīng)用于各種組織的染色,是組織學(xué)技術(shù)的基本方法,對任何液體固定的組織和各種包埋的切片均可使用,只是對不同包埋的切片法處理略有不同。下面簡介石蠟包埋切片的HE染色法。

  1、脫蠟:石蠟切片的組織內(nèi)部充滿石蠟,不能使水溶性染液著色,因此在染色前必須*先用二甲苯將石蠟脫掉,共兩次。

  2、下行入水:將已脫蠟的標(biāo)本浸入無水酒精及各級酒精,使組織逐步接近水。3、蒸餾水略洗。

  4、蘇木素溶液染色約5—15分鐘

  5、自來水洗去多余染料。

  6、入稀釋的鹽酸酒精溶液中分色,邊分色邊鏡檢,至核呈紅紫色,細(xì)胞質(zhì)無

  色為合適。

  7、分色后用自來水或加數(shù)滴氨水堿化,直至細(xì)胞核變成藍(lán)色。這一步驟也可稱為“藍(lán)化”。

  8、入蒸餾水洗去堿性水分。

  9、入70%酒精→80%酒精各5分鐘。

  10、入伊紅染液染色30秒至數(shù)分鐘。

  11、以95%酒精對伊紅分色,至胞漿,結(jié)締組織等呈桃紅色。

  12、上行脫水:染色后的切片,因組織內(nèi)含水而不透明,不能清晰地觀察其微細(xì)結(jié)構(gòu)。因此,須將組織內(nèi)的水分經(jīng)各級酒精→無水酒精逐步置換,*后進(jìn)入不含水份的透明劑內(nèi)。

  13、透明:入二甲苯透明劑,二次(各數(shù)分鐘)。

  結(jié)果:細(xì)胞核藍(lán)紫色,胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色,嗜酸性顆粒為鮮紅色,彈性纖維呈明亮桃紅色。

  


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